05204nam 2200613Ia 450 991087678590332120200520144314.01-282-02183-497866120218313-527-62436-83-527-62437-6(CKB)1000000000724940(EBL)481437(OCoLC)323537126(SSID)ssj0000107972(PQKBManifestationID)11129235(PQKBTitleCode)TC0000107972(PQKBWorkID)10015018(PQKB)11072812(MiAaPQ)EBC481437(EXLCZ)99100000000072494019970120d1997 uy 0gerur|n|---|||||txtccrAutomatische genetische Analytik /Gunter Mertes ... <et al.>Weinheim ;New York Wiley-VCHc19971 online resource (252 p.)Description based upon print version of record.3-527-30076-7 Includes bibliographical references and index.Automatische genetische Analytik; Copyright Page; Vorwort; Geleitwort; Inhalt; 1 Bedarf und Konzept einer integrierten automatischen DNA-Analyse; 1.1 Was hat die DNA-Analyse so populär gemacht?; 1.2 Methodische Quantensprunge machten die DNA,, reif"" für die Routineanalyse; 1.3 Was bedeutet integrierte automatische genetische Analyse?; 1.3.1 Teilbereiche der molekularen DNA-Analyse; 1.3.2 Das Konzept der Integration; 2 Die DNA-Präparation für die automatische DNA- Analyse; 2.1 Einführung; 2.2 Vektoren für die DNA-Präparation; 2.3 DNA-Präparation durch PCR; 2.4 Methoden zur Plasmidpraparation2.4.1 Alkalische Lyse2.4.2 Boiling-Methode; 2.4.3 Aufreinigung der Plasmid-DNA über Säulen; 2.5 ,,Solid-Phase""-DNA-Präparation; 2.6 Molekularbiologische Workstation; 2.7 Auswirkungen der DNA-Template-Qualität auf die automatische DNA-Sequenzierung; 2.8 Literatur; 3 Die PCR als Grundlage in der molekularen DNA- Analyse; 3.1 PCR - das Grundprinzip; 3.2 Automatisierung der PCR; 3.3 Optimierung von PCR-Reaktionen; 3.3.1 Reaktionsparameter; 3.3.2 Optimierungsstrategien; 3.4 Optimierung der Amplifikationspräzision; 3.5 Spezielle PCR-Verfahren; 3.5.1 Touchdown-PCR; 3.5.2 Nested-PCR3.5.3 Hot-Start-Technik3.6 Thermostabile Enzyme; 3.6.1 Taq-DNA-Polymerase; 3.6.2 rTth -DNA-Polymerase; 3.6.3 VentTM DNA-Polymerase; 3.6.4 Pfu-DNA-Polymerase; 3.6.5 UITmaTM DNA-Polymerase; 3.7 PCR und Kontaminationen; 3.8 Analyse der Amplifikationsprodukte; 3.8.1 Gelelektrophorese; 3.8.2 High Performance Liquid Chromatographie (HPLC); 3.8.3 Kapillar-Elektrophorese (CE); 3.8.4 TaqManTM-Assay zur Analyse von PCR-Produkten; 3.9 Literatur; 4 Die DNA-Synthese als grundlegendes Werkzeug in der molekularen DNA-Analyse; 4.1 Entwicklung der DNA-Synthese; 4.2 Chemische Grundlagen der DNA-Synthese4.3 Chemischer Ablauf der DNA-Synthese4.3.1 Detritylierung; 4.3.2 Monomeraddition; 4.3.3 Capping; 4.3.4 Oxidation; 4.4 Automatisierung der DNA-Synthese; 4.5 Optimierung der DNA-Synthese; 4.6 Aufarbeitung von Oligonukleotiden; 4.6.1 Gelelektrophorese; 4.6.2 High Performance Liquid Chromatographie (HPLC); 4.6.3 Kapillar-Elektrophorese; 4.7 Mögliche Konsequenzen der Verwendung nichtgereinigter Oligonukleotide auf spätere Anwendungen; 4.8 Markierung von Oligonukleotiden; 4.8.1 Biotin-Markierung; 4.8.2 Phosphorylierung; 4.8.3 Fluoreszenzmarkierung; 4.9 Anwendungen von Oligonukleotiden4.10 Literatur5 DNA-Sequenzanalyse; 5.1 Einleitung; 5.2 Sequenzier-Techniken; 5.2.1 Maxam-Gilbert-Sequenzierung; 5.2.2 Sequenzierung nach Sanger; 5.2.3 ,,Cycle-Sequenzierung""; 5.2.4 Multiplex-Sequenzierung; 5.3 Templates; 5.3.1 Phagen und Phagemide; 5.3.2 Plasmide und Cosmide; 5.3.3 PCR-Produkte; 5.3.4 Magnetic Beads; 5.4 Markierungs-Methoden; 5.4.1 Sequenzierung mit markierten Primern; 5.4.2 Sequenzierung mit markierten Desoxynukleotiden; 5.4.3 Sequenzierung mit markierten Didesoxynukleotiden (DyeTerminatoren); 5.4.4 Nachträgliche Sequenz-Markierung; 5.5 Der Weg zur vollständigen Sequenz5.5.1 Geringer Aufwand für die ProbenvorbereitungDie Bedeutung der genetischen Analyse hat in den letzten Jahren rapide zugenommen, und zwar nicht nur in Molekularbiologie und Medizin, sondern ganz besonders in ""molekularbiologisch fachfremden"" Gebieten, die sich ihrer zunehmend bedienen.Innerhalb der Rechtsmedizin und Kriminaltechnik z.B. ist die forensische DNA-Analytik mittlerweile zur Routinemethode geworden, auch in der Anthropologie und Paläontologie, in der Tier- und Pflanzenzüchtung und der Lebensmittelproduktion steht diese Entwicklung unmittelbar bevor.Dieses Buch gibt einen zusammenfassenden Überblick über die methodischGeneticsDNAGenetics.DNA.572.86576.5Mertes G. nter1761424MiAaPQMiAaPQMiAaPQBOOK9910876785903321Automatische genetische Analytik4200859UNINA